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2019-04-22 16:09

 相干膀胱疾病论文 CD_44V7/V8在膀胱移行细胞癌中的表白及 βG基因及βG前体药他杀基因系统对人膀 膀胱肿瘤尿零落细胞端粒酶活性的实验研 基质金属卵白酶及其抑制剂在膀胱移行细 P16基因导入对人膀胱癌细胞生长影响的 膀胱癌尿零落细胞角卵白20检测及其临床 膀胱癌相干NMPs剖析及其与EGFR基因相互 脊髓损伤后膀胱氮能神经转变的实验研讨 MDR1和MRP基因与膀胱癌耐药机制的相干 加强卡介苗与膀胱壁结合力的实验研讨 膀胱移行细胞癌中一氧化氮合酶的表白及 一、TOPOⅡ与膀胱癌多药耐药性关系的实 卡介苗激活杀伤细胞诱导T24细胞凋亡的 膀胱移行细胞癌微卫星不稳定性及其机制 CyclinD1,Rb和P16卵白在膀胱移行细胞 消炎痛、celecoxib抑制膀胱肿瘤T24细胞 【中文摘要】倾向膀胱癌是人类常见恶性肿瘤之一,严重威胁着人们的生命和安康。膀胱癌在我国泌尿系肿瘤中的发病率占第1位,复发率高是其显著特点,因此绝大多数患者在举行肿瘤切除手术后需举行膀胱灌注化疗。为了寻找一种更为有效的灌注化疗药物,国内外学者都在举行不懈的努力。羟基喜树碱(hydroxycamptothecin,HCPT)是从珙桐科植物喜树中提取得到的生物碱,从上世纪80年代开始应用于膀胱癌灌注化疗,并成为临床上举行膀胱癌化疗常用的药物之一,但其抗癌作用机制目前尚不十分清楚。最近几年研讨发觉,诱导细胞凋亡是HCPT发挥抗肿瘤作用的首要机制。Bcl-2基因是Bcl-2基因家族中最早被发觉,也是最首要的抗凋亡基因。有研讨发觉,很多凋亡刺激因素诱导细胞凋亡过程中,伴有Bcl-2卵白表白水平的下调。下降Bcl-2卵白表白水平可能是凋亡刺激因素诱导细胞凋亡的首要机制。本研讨应用HCPT作用于体外培育的人膀胱癌T24细胞,观察其作用效果,并检测药物作用后人膀胱癌T24细胞的Bcl-2卵白的表白水平,讨论羟基喜树碱对人膀胱癌T24细胞的凋亡诱导作用及其机制,深入研讨羟基喜树碱的生物学作用及其机制对膀胱癌的治疗具有首要的意义。方法一、MTT法检测细胞存活率对数生长期人膀胱癌T24细胞调整细胞浓度为1×10~5个/ml,接种于96孔培育板,24 h后加入终浓度别离为0.01、0.1、1、10μg/ml的羟基喜树碱,对比组加入等体积10%的1640培育液,每一个浓度设6个平行孔。继续培育48 h,MTT法检测细胞存活率。二、TUNEL法人膀胱癌T24细胞接种于盖玻片上,设对比组和实验组,实验组采纳1μg/ml羟基喜树碱处置48小时。从六孔板内取出盖玻片后,按照试剂盒说明书操作,每一个浓度重复3次,200倍光学显微镜下观察。每张盖玻片上随机计数500个细胞,计数凋亡细胞数占细胞总数的比率,即凋亡指数(apoptosis index,AI),计算公式:AI(%)=(凋亡细胞数/500)×100%。三、流式细胞仪(FcM)检测细胞凋亡率对数生长期人膀胱癌T24细胞调整细胞浓度为1×10~5个/ml,接种于25cm~2细胞培育瓶,24小时细胞80%左右融合,搜集对比组和别离经0.01、0.1、1、10μg/ml的羟基喜树碱处置48 h的人膀胱癌T24细胞,PI单染后流式细胞仪下检测。每一个浓度重复3次,每次计数10~4个细胞。采纳CELL QUEST软件举行DNA含量剖析,以G_0/G_1峰前涌现的亚二倍体细胞数量占细胞总数的百分率默示凋亡率。四、Western Blot检测Bcl-2卵白含量转变搜集对比组和羟基喜树碱(1μg/ml)处置48 h的人膀胱癌T24细胞,提取细胞总卵白。酚试剂法对提取的卵白样品举行定量。细胞总卵白作Bcl-2卵白含量剖析。每一个样本重复3遍。细胞总卵白以β-actin作内参照。采纳Fluorchem v2.0凝胶成像剖析软件(美国Alpha公司)对条带举行灰度扫描,以平均灰度和条带面积的乘积代表信号强度,以倾向条带和内参照灰度的比值默示卵白含量。五、了局判定和统计学剖析实验所得数据以(?)±s默示,均数比较采纳独立样本t检讨或单因素方差剖析q检讨。百分率样本值先举行平方根反正弦转换后再举行检讨。了局一、羟基喜树碱对T24细胞存活率的影响随羟基喜树碱浓度添加,A_(490)值逐渐下降,人膀胱癌T24细胞存活率逐渐下降。存活率与羟基喜树碱浓度呈较着负相干(r=-0.916,P<0.05)。二、TUNEL法举行细胞凋亡的形态学观察TUNEL法染色可见阳性细胞萎缩,胞核呈棕黄或棕褐色,胞浆可因胞核内染色质泄露而淡染,局部凋亡细胞萎缩成球形。200倍显微镜下,对比组仅可见极少阳性细胞,羟基喜树碱处置组阳性细胞数较着增多。对比组和1μg/ml羟基喜树碱处置组的AI别离为0.56%、22.32%,组间不同均有显著性(P<0.05)。三、凋亡率检测随羟基喜树碱浓度添加,FCM检测人膀胱癌T24细胞凋亡率逐渐添加。对比组和0.01、0.1、1、10μg/ml的羟基喜树碱处置组凋亡率别离为0.96%、12.17%、19.38%、31.82%、47.12%。0.01、0.1、1、10μg/ml的羟基喜树碱处置组凋亡率与对比组相比显著升高(P均

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